您能夠掌控好簡單而復雜的ELISA實驗嗎？當然，對實驗的熟練度與了解度還是要靠長時間積累經驗的。我公司技術部人員總結出ELISA實驗心得，一起來看看吧！
上海恒遠生物透徹分析酶聯免疫試劑盒實驗：
ELISA測定現通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測定模式，測定操作非常簡單，一般涉及到標本的收集保存、試劑準備、加樣、溫育、大鼠ELISA試劑盒洗板、顯色、比色、結果判斷和結果報告及解釋等方面，其中任一步驟的不當都會影響測定結果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。
盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單，但有可能會影響測定結果的因素卻較多，分布在測定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現問題的可能原因，特對常見問題及原因歸納總結于下表。
ELISA測定中可能會出現的問題及可能的原因問題可能的原因(非試劑盒本身的原因)：
1. 弱陽性質控樣本檢測不出 溫育的時間或溫度不夠；顯色反應時間太短；所用配制緩沖液的蒸餾水有問題
2. 測定的重復性差(相同樣本兩次測定結果不一致)這是典型的由測定操作引起的問題，包括加樣本及試劑量不準；孔間不一致；加樣過快，孔間發生污染。
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為什么重組蛋白作為我的ELISA的對照有差異？
首先要考慮的是重組蛋白的質量會高出試劑盒的可測試范圍數倍，必須將重組蛋白稀釋多次才能得到試劑盒的測試范圍。一般來說是從mg/毫升稀釋到pg/毫升，在這中間光是移液管的誤差就達到了可測量的水平。
其次要考慮的是R&D的免疫測試方法測量的蛋白水平是用一種抗體捕獲的、用第二種抗體測定的，這種測定是在試劑盒研發時與標準蛋白校正過的。這些經過測定的早期標準蛋白成為基本校正物，后來的標準都同它校正。這樣不同生產批號的免疫測定試劑盒將是一致的。這些基本校正物蛋白質量的測量方法也許與你的試劑管中蛋白質量的測定方法有所不同。
酶聯免疫實驗前的五項準備：
1. 使用前應將盒內各試劑取出，室溫放置至少30分鐘。
2. 準備各種實驗儀器及材料，如微量移液器，吸頭，醫用蒸餾水等
3. 濃縮洗液與醫用蒸餾水1:19倍稀釋后成為應用洗滌液
4. 濃縮樣品稀釋液與醫用蒸餾水1:4倍稀釋成應用樣品稀釋液
5. 應用樣品稀釋液來稀釋樣品，按照1:100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應用樣品稀釋液中，充分混勻待用。
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1. 根據檢測標本數量確定所需試劑的量。
2. 用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙上輕輕拍干，還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。
3. 應保證ELISA酶標板清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。
