一、抗原修復不充分

原因：甲醛固定導致抗原表位交聯封閉，或修復液pH值錯誤、時間不足。

解決：

使用pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液（多數抗體適用）。

高壓修復（121℃, 2~3分鐘）優于微波修復。

二、一抗問題

原因：濃度過低、孵育時間過短或抗體失效。

解決：

進行濃度梯度測試（如1:50~1:400）。

設立陽性對照驗證抗體活性。

三、組織固定不當

原因：固定時間過長（>48小時）或固定液濃度過高。

解決：

推薦10%中性福爾馬林固定6~24小時。

及時固定（大標本需切開）。

四、操作失誤

原因：組織干燥、切片過厚或試劑覆蓋不全。

解決：

保持切片濕潤，厚度控制在3~4μm。

使用DAKO筆圈畫組織防止液體流失。

五、DAB顯色異常

原因：顯色時間過長或DAB變質。

解決：

現配現用DAB，顯色時間控制在1~5分鐘。

顯微鏡下監控顯色過程。

六、其他因素

內源性酶未阻斷：用3% H2O2處理10分鐘（室溫）。

脫鈣組織處理：改用EDTA脫鈣液避免抗原破壞。

若問題持續，建議檢查抗體特異性或重新取樣。